[摘要] 目的 建立反相高效液相法測定增光片中五味子醇甲含量的方法。方法 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動相為甲醇-乙腈-水(60∶5∶32);檢測波長為250nm。結果 五味子醇甲在0.0672～0.672μg范圍內呈良好的線性關系;平均回收率為97.64%，RSD=1.21%。結論 該方法不僅操作簡單、準確，且重復性好，可用于增光片的質量控制。
[關鍵詞] 反相高效液相法;增光片;五味子醇甲;含量測定
增光片是由枸杞子、當歸、黨參、茯苓、五味子等10味中藥組成的中藥復方制劑。具有補益氣血、滋養肝腎、明目安神、增加視力的功效，臨床上用于治療近視眼[1]。本品收載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第十一冊，原標準中只有顯微鑒別和通用的理化鑒別，無含量測定項目，為了更好地控制產品質量，本文建立反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定增光片中五味子醇甲的含量，抑制增光片的質量，以確保臨床療效[2～5]。
1 儀器與試劑
1.1 儀器 日本島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外檢測器;CT-100恒溫箱。LC2002數據處理系統。上海必能信CQ-250型超聲波清洗器。BP211DAG電子天平(德國Sartorius)。
1.2 試劑 甲醇為色譜醇;甲醇、天水乙醇、乙腈均為分析純;水為重蒸水。五味子醇甲(中國藥品生物制品檢定所，批號：110857-200304);增光片(湖南德海制藥有限公司，批號：030426)。
2 方法與結果
2.1 色譜條件 (1)色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱Diamonsil(TM)C18(250×4.6mm)，5μm(迪馬公司);(2)流動相：甲醇-乙腈-水(60∶5∶32);(3)檢測波長：254nm;(4)流速：1.0ml/min;(5)柱溫：40℃。
論文網推薦：《中醫文獻雜志》前身是《杏苑》雜志，創刊于1956年上海市中醫文獻館復館之初。為內部刊物， 不定期出版。由當時館長董廷遙親筆題寫了刊名。1987年《杏苑》被上海市新聞出版局批準為正式內部刊物，以季刊形式定期出版發行，更名為《杏苑中醫文獻雜志》，明確以“繼承發揚老中醫學術經驗，整理研究古今中醫藥文獻”為辦刊宗旨。隨著該刊在國內外的影響日益擴大，作為內部刊物已很難適應海內外中醫界的要求，在上海市科委和上海市新聞出版局的積極支持下，于1994年正式批準本刊國內外公開發行，并更名為《中醫文獻雜志》。
2.2 對照品溶液的制備 精密稱取經五氧化二磷干燥12h的五味子醇甲對照品，加甲醇制成每1ml含0.0336mg的溶液，即得。
2.3 供試品溶液的制備 取增光片20片，除去糖衣，精密稱定，研細，取細粉約2g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理45min，放冷，再稱定重量，以甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。
2.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例稱取除五味子的其他藥材適量，依照增光片的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。
2.5 線性關系的考察 分別精密吸取五味子醇甲對照品溶液(濃度0.0336mg/ml)2μl、4μl、8μl、12μl、20μl，注入液相色譜儀，測定，以五味子醇甲的進樣量(μg)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線。回歸方程為Y=8E+06X+23682(r=0.9997)。結果表明五味子醇甲在0.0672～0.672μg范圍內具有良好的線性關系。
2.6 精密度試驗 精密吸取五味子醇甲對照品溶液(0.0336mg/ml)10μl，重復進樣6次，峰面積積分值分別為2395570、2440616、2396849、2394535、2467203、2425933，RSD=1.24%。表明本方法精密度良好。
2.7 重復性試驗 取同一批增光片(批號：030426)，除去糖衣，研細，取細粉5份，每份約2g，精密稱定，按2.3項下的方法制備樣品，進行含量測定。結果分別為0.1026mg/片、0.0999mg/片、0.0992mg/片、0.0986mg/片、0.0982mg/片，平均為0.0997mg/片，RSD為1.75%。表明本方法具有較好的重復性。
2.8 穩定性試驗 取重復性試驗項下試驗號4的供試品溶液，每2h進樣1次，每次10μl，連續進樣6次，結果表明在10h內峰面積積分值基本穩定，RSD為1.58%。結果平均回收率為97.64%，RSD為1.21%。見表1。
2.9 回收率試驗 貯備溶液：精密稱取五味子醇甲對照品3.7mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1ml中含五味子醇甲0.37mg的溶液。
取已知含量(批號：030426，含量為0.0997mg/片)的增光片，除去糖衣，研細，取1.0g(6份)，精密稱定，置錐形瓶中，分別精密加入貯備溶液0.8ml、1ml、1.2ml，置水浴上揮發至干，按供試品溶液制備方法進行制備并測定含量，計算回收率，結果平均回收率為97.64%，RSD為1.21%。見表1。
表1 回收率試驗結果(略)
2.10 樣品測定 按擬定的含量測定方法測定10批增光片中五味醇甲的含量，結果見表2。
表2 含量測定結果(略)
3 討論
筆者曾對提取溶媒、提取時間進行了考察，結果以加入甲醇、超聲處理45min為佳。干擾試驗結果表明：五味子的陰性對照樣品無干擾。方法學考察結果表明：五味子醇甲在0.0672～0.672μg范圍內呈良好的線性關系;該方法精密度良好，具有較好的重復性和穩定性，平均回收率為97.64%。因此該方法可用于增光片的質量控制。根據測定的結果，并考慮到藥材的產地、采收、加工等因素，暫定每片增光片含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)計，不得少于0.05mg。
[參考文獻]
1 中華人民共和國衛生部藥典委員會.衛生部藥品標準中藥成方制劑.北京：化學工業出版社，1996，207.
2 趙陸華.高效液相色譜法分析中藥成分手冊.北京：中國醫藥科技出版社，1994，216.
3 楊云.中藥化學成分提取分離手冊.北京：中國中醫藥出版社，1998，73.
4 陳德昌.中藥化學對照品工作手冊.北京：中國醫藥科技出版社，2000，18.
5 譚生建.肝復康中五味子醇甲和五味子乙素含量測定方法的研究.解放軍藥學學報，2000，16(5)：270.
