摘要：為研究麻黃堿對腦缺血大鼠運動功能恢復(fù)的影響及相關(guān)的分子機制，選取體重為220～250 g的56只雄性SD大鼠，并隨機將其分為麻黃堿治療組、自然恢復(fù)組和假手術(shù)組，應(yīng)用Koizumi線栓法建立單側(cè)大腦中動脈閉塞(MCAO)模型。應(yīng)用橫木行走試驗在術(shù)后1、2、3、4周對其運動功能改善情況進行評定，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對缺血周圍區(qū)突觸素(SYP)、生長相關(guān)蛋白(GAP-43)表達的變化進行檢測。結(jié)果表明，在各時間點，假手術(shù)組大鼠運動功能無明顯改變(P>0.05);在術(shù)后1周，運動功能評分最低的為自然恢復(fù)組，但隨著時間的推移，自然恢復(fù)組的運動功能不斷改善;相對于自然恢復(fù)組而言，麻黃堿治療組運動功能恢復(fù)速度明顯更快，且在術(shù)后1、2、3周，麻黃堿治療組均明顯快于自然恢復(fù)組(P<0.05);4周之后，3組之間無顯著差異(P>0.05)。在1、2、3周時，免疫組化光密度定量測定結(jié)果顯示麻黃堿治療組GAP-43和SYP的表達水平均明顯高于自然恢復(fù)組。說明麻黃堿可對腦缺血后動物的運動功能恢復(fù)速度進行加速，且麻黃堿的加速機制與促進腦內(nèi)結(jié)構(gòu)重建和神經(jīng)重塑的分子表達有關(guān)。

　　關(guān)鍵詞：麻黃堿;腦缺血;大鼠;運動功能;分子機制

　　《中國畜牧業(yè)》(半月刊)創(chuàng)刊于1992年，是由全國畜牧總站;中國動物疫病預(yù)防控制中心;中國牧工商(集團)總公司主辦的刊物。

　　麻黃一直被中醫(yī)認(rèn)為有著活血通絡(luò)的功效。根據(jù)相關(guān)文獻顯示，在對腦缺血所致的中風(fēng)后遺癥進行治療時，麻黃與其他中藥配伍使用，對神經(jīng)功能缺損癥狀有明顯的改善。然而，對中樞神經(jīng)系統(tǒng)康復(fù)的作用及機理方面，單味的麻黃卻沒有明確的定論，但相關(guān)人士普遍認(rèn)為與麻黃的主要藥用成分麻黃堿有關(guān)。基于此，本次研究選取了56只雄性SD大鼠，應(yīng)用Koizumi線栓法建立單側(cè)大腦中動脈閉塞(MCAO)模型，以此來研究麻黃堿對腦缺血大鼠運動功能恢復(fù)的影響及相關(guān)的分子機制。

　　1 材料與方法

　　1.1 分組動物

　　選取體重為220～250 g的56只雄性SD大鼠，隨機將其分為麻黃堿治療組(24只)、自然恢復(fù)組(24只)和假手術(shù)組(8只)。術(shù)后1、2、3、4周為各組的4個時間點，且在各時間點取不同數(shù)量的大鼠(麻黃堿治療組6只，自然恢復(fù)組6只和假手術(shù)組2只)進行各項目的檢測。

　　1.2 模型的制備

　　應(yīng)用Koizumi線栓法建立單側(cè)MCAO模型。首先麻醉大鼠，固定于手術(shù)臺上時取仰臥位，頸前正中行縱行切口，對頸內(nèi)動脈(ICA)、頸外動脈(ECA)、右側(cè)頸總動脈(CCA)進行分離暴露，并結(jié)扎CCA近端和ECA根部，剝離迷走神經(jīng)。由頸外動脈插入栓線，經(jīng)頸內(nèi)動脈到大腦前動脈，機械性阻斷大腦中動脈發(fā)出處的血供來建立大腦中動脈缺血模型。如果需要再灌注，只需拔出栓線結(jié)扎傷口，即可恢復(fù)大腦血供。本試驗缺血2 h后取出栓線實現(xiàn)再灌注。假手術(shù)組步驟與手術(shù)組相同，只是不插入栓線。

　　1.3 給藥方法

　　大鼠手術(shù)后，麻黃堿治療組大鼠使用麻黃堿腹腔注射(3 mg/kg體重)，每3 d注射一次，其余兩組給予同劑量的生理鹽水進行注射。

　　1.4 對運動功能進行評定

　　應(yīng)用橫木行走試驗在術(shù)后1、2、3、4周對大鼠運動功能改善情況進行評定。橫木放置于距地面70 mm的高度，直徑25 mm，長1 200 mm。按照0～6分法來劃分等級。6分：無腳滑現(xiàn)象，能到達終點;5分：少量腳滑現(xiàn)象，能到達終點;4分：在一半以上的路程中出現(xiàn)腳滑現(xiàn)象，能到達終點;3分：肢體在前進時不起作用，能到達終點;2分：在前進時掉下;1分：可以站在橫木上，不能前進;0分：掉下。

　　1.5 免疫組織化學(xué)檢測

　　應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對缺血周圍區(qū)突觸素(SYP)、生長相關(guān)蛋白(GAP-43)表達的變化進行檢測。SYP及GAP-43均為Sigma公司產(chǎn)品。整個操作過程均嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進行。

　　1.6 統(tǒng)計學(xué)處理和圖像分析

　　用積分光密度值反映SYP和GAP-43免疫反應(yīng)產(chǎn)物的強度和面積。要得出積分光密度值，首先要求出各陽性區(qū)光密度的積分和(∑∫ OD)。被檢各區(qū)在每例標(biāo)本中均對3張切片進行檢測，并取其均值。用x±s表示所得結(jié)果。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 各試驗組在不同時間的運動功能評分

　　由表1可見，假手術(shù)組大鼠運動功能在各時間點均無明顯改變(P>0.05);在術(shù)后1周，運動功能評分最低的為自然恢復(fù)組，但隨著時間的推移，自然恢復(fù)組大鼠的運動功能不斷改善;相對于自然恢復(fù)組，麻黃堿治療組大鼠恢復(fù)速度明顯更快，且在術(shù)后1、2、3周均明顯快于自然恢復(fù)組(P<0.05);4周之后，3組之間無顯著差異(P>0.05)。

　　2.2 GAP-43免疫組化染色結(jié)果

　　神經(jīng)氈位置為GAP-43免疫反應(yīng)產(chǎn)物的主要存在區(qū)，其染色也隨著免疫產(chǎn)物和免疫反應(yīng)的增強而加深。

　　假手術(shù)組：少量著色位于神經(jīng)氈位置，免疫產(chǎn)物在兩半球?qū)ΨQ分布。不同的時間點之間無顯著差異(P>0.05)。

　　自然恢復(fù)組：在梗死中心區(qū)未見到GAP-43的表達。在1周時GAP-43在梗死周圍區(qū)的免疫活性達到高峰，在2周時開始降低，4周之后與假手術(shù)組之間無明顯差異(P>0.05)。

　　麻黃堿治療組：與自然恢復(fù)組有相同的GAP-43表達變化趨勢。相較于自然恢復(fù)組，在前3個時間點其表達水平均明顯偏高(P<0.05)(表2)。

　　顆粒狀沉積或棕黃色點狀為SYP免疫反應(yīng)產(chǎn)物，神經(jīng)氈內(nèi)為SYP免疫反應(yīng)產(chǎn)物的分布位置。免疫反應(yīng)強弱與突觸類型、顆粒的大小有關(guān)。