摘要：由于覆盆子基礎研究薄弱，2010年版《中國藥典(一部)》中僅有性狀鑒別和顯微鑒別。目前已有椴樹苷的HPLC含測方法報道，但尚無覆盆子中的金絲桃苷定量測定的文獻。本實驗采用HPLC法對其進行了含量測定，結果表明，該方法快速簡捷、重現性好，取得了滿意的結果。
1 實驗部分
1.1 儀器與試藥
HP-Agilent1100型高效液相色譜儀，包括G1322A真空脫氣機，G1311A四元泵，G1313A自動進樣器，G1365A多波長檢測器，LGC-1025M柱溫箱，HP Rev.A.07.01色譜工作站;BP211D型1/10萬電子分析天平(德國Sartorius公司);250超聲波清洗器(上海)。
金絲桃苷對照品(供含測用，中國藥品生物制品檢定所提供，批號：111521-200303)。乙腈(色譜純，美國Tedia公司)，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。
覆盆子Rubi Fructus，經鑒定為薔薇科植物華東覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果實。
1.2 方法與結果
1.2.1 色譜條件與系統適用性考察
色譜柱：SinoChrom ODS BP(5μm，4.6×250mm);流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85);流速：1mL/min;檢測波長：360nm;柱溫：30℃;進樣量：10μL;理論板數按金絲桃苷峰計算應不低于5000。
1-金絲桃苷 1-Hyperin
圖1 對照品(A)和樣品(B)的色譜圖
Fig.1 Chromatograms of reference substance(A)and sample(B)
1.2.2 對照品溶液的制備
精密稱取金絲桃苷對照品10.12mg，置100mL量瓶中，加80%甲醇使溶解并定容至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密吸取2mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
1.2.3 供試品溶液的制備
取本品粉末(過四號篩)1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250w，頻率40kHz)1小時，放冷，再稱定重量，加80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
1.2.4 線性關系考察
精密吸取“1.2.2” 項制備的對照品貯備液0.5，1，2，3，5，10mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液10μL，按“1.2.1”項色譜條件測定，以進樣濃度為橫坐標(X：mg/mL)，峰面積積分值為縱坐標(Y ：mAU*s)，進行線性回歸，得回歸方程：Y = 208.3 1X - 0.0134，r = 0.999 94。結果表明，金絲桃苷在0.00506~0.1012mg/mL的范圍內呈良好線性關系。
1.2.5 精密度試驗
精密吸取“1.2.2”項下制備的對照品溶液10μL，重復進樣6次，測定峰面積，結果RSD=0.22%，表明本法精密度良好。
1.2.6 穩定性試驗
取供試品溶液于制備后0、2、4、6、8、10h進樣，金絲桃苷峰面積的RSD=0.59%，表明供試品溶液在10h內穩定。
1.2.7 重復性試驗
稱取同一批樣品6份，按“1.2.3”項下方法處理并測定含量，結果金絲桃苷RSD=1.17%，表明此方法重復性較好。
1.2.8 回收率試驗
稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入一定量的對照品，按“1.2.3”項下方法處理并測定含量，分別計算樣品加樣回收率(結果見表1)，平均回收率為98.77%，RSD=1.57%。
表1 金絲桃苷回收率試驗結果
2 討論與總結
2.1 流動相的選擇
本實驗通過對乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液等多種不同比例的流動相進行比較試驗，結果乙腈-0.1%磷酸溶液比例為15:85的系統分離效果較好，且峰形較好，故選擇本系統為流動相。
2.2 含量測定的討論
本實驗中1.2.9樣品的含量測定中第二批的含量和其它兩批含量差異較顯著，分析原因可能與覆盆子來源不同有關系，因此，仍需做大量實驗來驗證。
2.3 含量與功效的關系
本實驗確定了覆盆子中的黃酮類化合物為金絲桃苷，但是金絲桃苷含量的高低與覆盆子的功效之間的聯系仍不明確，還有待進一步研究。
