【摘要】 目的 探討Bcl-2的表達與甲狀腺癌的發生、發展及預后的關系。方法 應用免疫組化方法，以單克隆抗體鼠抗人Bcl-2標記77例甲狀腺癌、58例甲狀腺腺瘤、40例癌旁甲狀腺組織和28例正常甲狀腺組織。觀察不同甲狀腺組織中Bcl-2的表達，并比較其陽性率。結果 Bcl-2陽性反應見于甲狀腺癌、甲狀腺腺瘤及癌旁甲狀腺組織。在甲狀腺癌組織中Bcl-2陽性率為45.5%，高于甲狀腺腺瘤組織(22.4%)(P=0.006)、癌旁甲狀腺組織(17.5%)(P=0.003)和正常甲狀腺組織(0)(P=0.000)。甲狀腺未分化癌和濾泡狀癌組織中Bcl-2的陽性率明顯增高。存在淋巴結轉移和臨床Ⅲ、Ⅳ期病例中，Bcl-2的陽性率明顯增高。結論 Bcl-2過量表達可能與甲狀腺腫瘤的發生有關，癌組織中Bcl-2的表達可作為甲狀腺癌預后的參考指標。文章發表在《中國醫學工程》上，是醫學職稱論文發表范文，供同行參考。

　　【關鍵詞】 甲狀腺腫瘤;Bcl-2基因;原癌基因;基因表達;免疫組化

　　甲狀腺癌是常見的內分泌腫瘤，女性發病率高。臨床甲狀腺腫瘤中有5%~10%為甲狀腺癌[1]。其中分化型甲狀腺癌占90%，包括甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺濾泡狀癌，未分化癌較為少見，其惡性程度高、預后差。國內資料顯示我國甲狀腺癌的發病率在明顯增加[2]。近年來，甲狀腺癌的相關基因和腫瘤標志物研究進展很快。研究證實[3,4]，Bcl-2基因是一種細胞凋亡抑制基因，最早發現于濾泡性B細胞性淋巴瘤中，其產物Bcl-2蛋白可抑制細胞凋亡，延長細胞生存期。本研究采用免疫組化技術，通過檢測Bcl-2在甲狀腺癌組織、甲狀腺腺瘤組織、甲狀腺癌旁組織及正常甲狀腺組織中的表達水平，探討Bcl-2在甲狀腺癌組織中的發生發展過程中的作用，以揭示Bcl-2與甲狀腺癌的生物學行為的關系及其預后關系。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　全部標本取自北京大學深圳醫院普通外科2001年至2009年間手術治療的甲狀腺病例標本，其中：甲狀腺癌77例(男28例，女8例，平均50歲)，58例甲狀腺腺瘤(男22例，女36例，平均36歲)，同時取癌旁甲狀腺組織40例(男10例，女30例，平均37歲，經病理檢查確診均無甲狀腺癌浸潤);取正常甲狀腺組織28例(男9例，女l9例，平均35歲)。對77例甲狀腺癌按WHO標準組織學分類：乳頭狀癌55例，濾泡狀癌l4例，未分化癌8例，按AJCC標準臨床病理分期：I期30例，Ⅱ期23例，Ⅲ 期16例，Ⅳ期8例;其中，有淋巴結轉移者33例，無淋巴結轉移者44例。標本經10% 福爾馬林液固定、石蠟包埋，常規切片，60℃烤片2 h，37℃過夜備用。

　　1.2 免疫組化試劑

　　Bcl-2鼠抗人單克隆抗體，為美國ZYMED公司產品。SP-9000通用型試劑盒為美國ZYMED公司產品。用已知Bcl-2陽性的扁桃體作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性空白對照。

　　1.3 試驗方法

　　切片脫蠟水化后，3%H2O2室溫處理15 min，微波抗原修復，正常山羊血清室溫孵育30 min，滴加一抗，4℃冰箱孵育過夜。滴加生物素標志的二抗，室溫孵育30 min，滴加辣根過氧化酶標記的鏈親和素室溫30 min，DAB顯色。經蘇木精復染后，脫水、透明、封片。

　　1.4 判斷標準 Bcl-2定位于細胞膜及細胞質，以細胞膜及細胞質內出現黃色至深棕黃色顆粒為陽性細胞。無陽性細胞為Bcl-2陰性;有陽性細胞為Bcl-2陽性。所有標本均由兩位病理醫師采用盲法閱片，結果不一致時協調統一判斷最終結果。

　　1.5 統計學分析

　　所有數據采用SPSS 13.0統計軟件包在電腦上進行統計分析，進行χ.2檢驗，以P≤0.05為差異有統計學意義。

　　2 結果

　　2.1 Bcl-2在不同甲狀腺組織中的表達情況,見表1。

　　光鏡下Bcl-2陽性反應表現為細胞膜及細胞質染成棕褐色，未見棕褐色顆粒為陰性。Bcl-2陽性率在甲狀腺癌為45.5%，高于甲狀腺腺瘤(22.4%)(P≤0.01)及癌旁甲狀腺組織(17.5%)(P≤0.01)，而正常甲狀腺組織染色陰性。見表1。

　　2.2 甲狀腺癌中Bcl-2表達與甲狀腺癌有關病理指標的關系，見表2。Bcl-2的表達程度與甲狀腺癌組織學類型、淋巴結轉移情況和臨床病理分期有顯著關系。在惡性度較高的未分化癌和濾泡狀癌中，Bcl-2陽性率明顯高于惡性度較低的乳頭狀癌;在有淋巴結轉移病例或臨床Ⅲ 、Ⅳ期病例，Bcl-2陽性率高于相應的無淋巴結轉移和臨床I、Ⅱ期病例，差異均有統計學意義(P0.01)。

　　3 討論

　　細胞凋亡又稱細胞程序化死亡，受基因調控，調控基因大體分為凋亡抑制基因和凋亡促進基因，二者此消彼長，共同調節細胞的凋亡， 對其研究將是解決細胞凋亡機制的根本。但迄今為止其確切作用機制仍不完全清楚。

　　bcl-2基因家族在凋亡的調節中起重要作用，是研究熱點之一。Bcl-2基因即B細胞淋巴瘤/白血病基因-2(B-cell lymphoma/leukemia-2)，是Tsujimoto等[5]于1984年首次在濾泡型B淋巴瘤中發現，由此命名Bcl-2。正常位于18號染色體的長臂2區1帶，開始是通過染色體易位(14，18)斷裂點的分子克隆方法，從濾泡型淋巴細胞瘤中分離出來的，被人們認為是人類濾泡型淋巴細胞瘤的細胞遺傳學標志，由2個外顯子組成，其基因產物在人類中的表達與細胞壽命長短相關。近年來，人們通過廣泛的研究發現，Bcl-2基因有阻滯細胞凋亡發生的作用，故被認為是抗細胞凋亡基因[6]。其抑制凋亡的機制，以前報道籠統說通過阻止細胞凋亡信號傳輸的最后共同通路而起作用。通過對bcl-2結合蛋白和bcl-2同源蛋白的研究，對bcl-2家族調控凋亡的基本模式有了新的認識。bcl-2同源蛋白包括bcl-2、bcl-xL、bax、bad以及線蟲的ced-9，bcl-2、bax可以以同二聚體形式存在，也可形成異二聚體，bax同源二聚體形成，誘導凋亡，bax--bcl-2異二聚體形成，抑制凋亡;而當bcl-xs存在時，優先與bcl-2形成異二聚體，使bax得以游離形成同二聚體，誘導凋亡，因此，有時bcl-2表達并不一定抑制細胞凋亡的發生。一般認為，bcl-2基因表達與瘤細胞的分化程度及增殖能力有關，分化程度低，增殖能力強的瘤細胞，其bcl-2呈現出過量表達趨勢。本研究中，作者系統地檢測了甲狀腺癌組織、甲狀腺腺瘤組織、甲狀腺癌旁組織及正常甲狀腺組織等多種甲狀腺組織中Bcl-2的表達情況，顯示在甲狀腺癌組織Bcl-2的表達率為45.5%，顯著高于甲狀腺腺瘤組織(22.4%，P=0.006)、甲狀腺癌旁的組織(17.5%，P=0.003)及正常甲狀腺組織(0，P=0.000)，揭示出甲狀腺腺瘤的濾泡上皮細胞bcl-2陽性染色強度及陽性細胞數較正常甲狀腺濾泡上皮細胞增強增多，甲狀腺癌又超過腺瘤，提示bcl-2可能在調節甲狀腺上皮的凋亡中伴演重要角色，在甲狀腺癌中有更多的上皮細胞具有逃避凋亡的能力，甲狀腺癌的發生可能與bcl-2過量表達有關。研究表明，對于甲狀腺癌，腫瘤組織學類型、年齡、淋巴結轉移情況及臨床病理分期是評估預后的主要指標[7、8]。本組研究結果表明，在分化程度很低的未分化癌和相對較低的濾泡狀癌中，Bcl-2的表達率分別為100%與78.6%，明顯高于乳頭狀癌Bcl-2的表達率(29.1%)，差異均具有統計學意義;在有淋巴結轉移的病例或III、IV期甲狀腺癌病例中，癌組織中Bcl-2的表達明顯增強，差異均具有統計學意義。Bcl-2在甲狀腺癌所有類型中均有表達，并且分化越差表達程度越高，因此，有理由認為，Bcl-2陽性提示甲狀腺癌預后較差，并且表達程度越高預后也就越差。癌組織Bcl-2高表達與甲狀腺癌的分化程度、組織學亞型、增值侵襲能力、淋巴結轉移以及預后有關，可作為判斷甲狀腺癌預后的一個重要參考指標。因此，對于甲狀腺腺瘤患者，作腫瘤組織Bcl-2檢測并對陽性病例進行密切隨訪可能具有重要意義。

　　參考文獻

　　[1] Hegedus L.Clinical practice：the thyroid nodule.N Engl J Med，2004，351(17)：1764-1771.

　　[2] 關海霞，單忠艷，米小軼，等.普通食鹽碘化前后甲狀腺癌發病變化的11年病理資料分析.中國醫科大學學報，2006，35(3)：284-285.

　　[3] Soda G，Antonaci A，Bosco D，et al.Expression of bcl-2，cerb-2，p53，and p21(wafl-cip)protein in thyroid caecinoma.J Exp Clin Cancer Res，1999，18(3)：363.

　　[4] Sreelekha TT，Pradeep VM，Vijayalakshmi K，et al.In situ apoptosis in the thyroid .Thyroid，2000，10(2)：117.

　　[5] Muller Hocker J.Immunoreactivity of P53.Ki67 and bcl-2 in oncocytic adenomas and carcinomas of thyroid gland .Hum Pathol，1999，30(8)：926.

　　[6] Swanton E，Savory P，Cosulich S，et al.Bcl-2 regulates a Caspase-3/Caspase-2 apoptotic cascade in cytosolic extracts .Oncogene，1999，18(10)：1781.

　　[7] 張林，吳亞群.分化型甲狀腺癌的預后評估和監測.實用臨床醫藥雜志,2004，8(3)：3.

　　[8] 陳福進，李秋梨，張詮，等.分化型甲狀腺癌的治療及影響復發的因素分析 .癌癥，2004，23(11)：1311.

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