【摘要】 白血病是造血系統的惡性腫瘤，在形態上變化雖相當大，但仍能表達正常血細胞所具有的抗原，因而可依據其抗原的表達譜對白血病進行免疫分型. 我們對24例臨床確診為急慢性白血病，但形態學分型較困難的患者，應用流式細胞儀對其進行了免疫分型，并與FAB分型進行了比較.

　　【關鍵詞】 白血病;免疫分型;流式細胞儀

　　目的： 應用流式細胞儀對24例臨床形態學診斷困難的急慢性白血病進行快速、有效地免疫分型，以指導臨床化療. 方法： 采用單克隆抗體雙色直接免疫熒光標記法及多參數流式細胞術(FCM)，分型根據抗體積分系統，并與FAB分型進行比較. 結果： ① 9例臨床診斷慢性淋巴細胞白血病經FCM免疫分型確診為B淋巴細胞性白血病;

　　② 5例臨床診斷急性淋巴細胞白血病(L2)的患者經FCM免疫分型確診1例為B淋巴細胞性白血病;2例為T淋巴細胞性白血病，且1例伴紅系異常改變; 1例為未分化型白血病;1例為淋巴細胞白血病B，T雙表達;③ 5例急性非淋巴細胞性白血病經FCM免疫分型確診2例為髓系白血病;3例為紅白血病(M6);④ 1例MDS伴骨髓纖維化經FCM免疫分型確診為M6;⑤ 4例疑似粒淋雙表型白血病經FCM免疫分型確診為粒淋雙表型白血病. 免疫分型與FAB分型的符合率為79.2%. 結論： 流式細胞儀多參數白血病免疫表型分析，可以彌補FAB分型的不足，為臨床診斷提供重要依據，并為白血病治療措施的個體化提供依據.

　　0引言

　　1材料和方法

　　1.1材料白血病患者的骨髓24(男11，女13)例，年齡17～67(平均44)歲. 所用單抗包括FITC標記的MsIgG1,CD10,CD20,CD3,CD7,HLADR,CD41及Glycophorin A;藻紅蛋白(PE)標記的MsIgG1,CD19,CD22,CD5,CD33,CD13及CD34，均購自美國BD公司.

　　1.2方法骨髓經肝素抗凝后，PBS稀釋5倍，使用Ficoll(1077 g/L)分離骨髓單個核細胞，PBS洗滌2次，以2×1010/L懸于PBS中，按文獻[1]方法進行標記. 以標記FITC的抗鑰孔嘁血藍素mAbIgG2a和標記PE的抗鑰孔嘁血藍素mAbIgG1處理細胞作為陰性對照. 應用美國BD公司的FACSort流式細胞儀進行檢測，每個樣本收集5000～10 000個細胞，Cellquest軟件分析其抗原表達情況.

　　2結果

　　2.1抗原表達B淋巴細胞性白血病抗原表達為：CD19,20,22,HLADR; T淋巴細胞性白血病伴紅系異常改變陽性抗原表達為：CD5,CD3, CD7,HLADR，Glycophorin A(63.1%);髓系白血病抗原表達為：CD13,CD33;紅白血病(M6)抗原表達為：Glycophorin A[(96.4±5.6)%],CD34和CD41均為陰性;淋巴細胞白血病B,T雙表達陽性抗原為：CD19,CD10,CD20,CD3(89.3%), CD13,HLADR; 粒淋(B)雙表型白血病抗原表達為:CD19,CD10,CD20,CD22,CD33,CD13,HLADR;粒淋(T)雙表型白血病抗原表達

　　為:CD5,CD3,CD33,CD7,CD13,HLADR(表1).

　　2.2形態學和免疫分型臨床診斷慢性淋巴細胞白血病9例經FCM免疫分型確診為B淋巴細胞性白血病;臨床診斷急性淋巴細胞白血病(L2)的5例經FCM免疫分型確診1例為B淋巴細胞性白血病;2例為T淋巴細胞性白血病，且1例伴紅系異常改變; 1例為未分化型白血病;1例為淋巴細胞白血病B,T雙表達;急性非淋巴細胞性白血病5例經FCM免疫分型確診2例為髓系白血病;3例為紅白血病(M6); MDS伴骨髓纖維化1例經FCM免疫分型確診為M6;疑似粒淋雙表型白血病4例經FCM免疫分型確診為粒淋雙表型白血病. 免疫分型與FAB分型的符合率為79.2%(表2).

　　表1流式細胞儀免疫分型(略)

　　ND+：抗原表達量>20%. -：抗原表達量<20%. ND:未測.

　　表2形態學分型和FCM免疫分型(略)

　　3討論

　　白血病的主要類型有源自未成熟T或B淋巴細胞的ALL，源自未成熟骨髓細胞的AML，源自成熟B淋巴細胞的CLL，源自粒細胞前身的CML. 準確的診斷可以指導臨床選擇最有效的治療手段. 一般認為形態學鑒定細胞性質準確率在60%，而免疫學分型可超過90%，尤其在下列情況下，應用單克隆抗體對白血病進行免疫分型更為必要. 用形態學、細胞化學染色不能肯定細胞來源的白血病[2-3]. 如：未分化型白血病和混合細胞性白血病;形態學為急性淋巴細胞白血病(ALL)或急性未分化白血病(AUL)但缺乏特異性淋巴細胞系列抗原標記;部分髓系白血病;慢性淋巴細胞白血病;微小殘留白血病.

　　目前，臨床對急慢性白血病的診斷主要是根據對原始血細胞的形態學與細胞化學染色的分析來診斷. 隨著免疫學單抗技術的不斷提高和對白細胞抗原研究的日趨深入，學者們認識到有些抗原特異性強，很少發生交叉表達，如CD3,CD22,CD79,MPO等，有些曾被認為屬于某一系列特異性的抗原實際在其他系列的某一階段或特殊情況下也可能出現[2,4],我們對24例臨床形態學及細胞化學染色難以分型的急慢性白血病，采用流式細胞術進行了免疫分型. 其中，1例急性淋巴細胞白血病經FCM分型確診為淋巴細胞白血病T,B雙表達， 1例臨床診斷急淋L2并疑似粒淋雙表型白血病的患者，經FCM分型確診為T淋巴細胞性白血病伴紅系異常改變，即淋紅雙表;以上兩例經FCM分型的白血病在國內尚未見報道;經FCM分型確診為M6的4例白血病，臨床無1例疑似M6診斷;而4例疑似粒淋雙表型白血病經FCM分型均確診為粒淋雙表型白血病;免疫分型與FAB分型的符合率為79.2%. 與其他學者報告的83.9%相近[5]. 流式細胞儀多參數白血病免疫表型分析不僅可以有效地支持臨床診斷，還可以彌補FAB分型的不足，為臨床診斷提供重要依據. 此外，免疫分型還可以提示預后，監測病程的發展、療效，進行微小殘留白血病的檢測，從而為臨床預測白血病復發，選擇個體化治療方案提供重要的依據.