摘 要 卵巢癌的死亡率高，是嚴(yán)重威脅女性健康的重大疾病。當(dāng)前，由于缺乏有效、便捷的早期診斷技術(shù)，大部分卵巢癌患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)處于中晚期而錯(cuò)失最佳治療時(shí)機(jī)。因此，對(duì)早期卵巢癌的快速、靈敏、低成本和準(zhǔn)確檢測(cè)具有非常重要的意義。在早期卵巢癌患者血液中存在溶血磷脂酸(Lysobisphosphatidic acids， LPA)濃度升高現(xiàn)象，而在其它疾病中卻較少出現(xiàn)此情況，因此LPA可作為一種高特異性、有良好臨床應(yīng)用前景的卵巢癌標(biāo)志物。近年來， 該領(lǐng)域的相關(guān)研究取得了較大的進(jìn)展， 開發(fā)了很多LPA的檢測(cè)技術(shù)和方法。本文對(duì)LPA的檢測(cè)方法進(jìn)行分類、歸納和總結(jié)，著重介紹了近年來該領(lǐng)域的重要進(jìn)展，最后對(duì)LPA標(biāo)記物檢測(cè)在臨床應(yīng)用方面所面臨的挑戰(zhàn)進(jìn)行了分析， 對(duì)其發(fā)展和前景進(jìn)行了展望。

　　關(guān)鍵詞 卵巢癌; 溶血磷脂酸; 癌癥標(biāo)志物; 質(zhì)譜檢測(cè); 比色檢測(cè); 熒光檢測(cè); 評(píng)述

　　1 引 言

　　卵巢癌是嚴(yán)重威脅女性健康的疾病[1，2]。由于卵巢癌早期缺少癥狀，篩查方法有限，因此其早期診斷比較困難。75%的卵巢癌患者就診時(shí)已為晚期，而晚期病例療效不佳(晚期卵巢癌患者5年生存率僅25%)[3～6]。因此，雖然卵巢癌的發(fā)病率居?jì)D科惡性腫瘤的第三位，但其死亡率高居?jì)D科癌癥首位。值得注意的是，早期確診的卵巢癌患者5年生存率為90%。因此，實(shí)現(xiàn)卵巢癌早期診斷，可以大幅度降低卵巢癌的死亡率。目前，臨床上卵巢癌診斷的方法主要包括影像學(xué)檢查(超聲成像、計(jì)算機(jī)斷層掃描、正電子發(fā)射斷層掃描及核磁共振成像等)、組織病理切片等。影像學(xué)檢查手段能夠明確盆腔腫塊是否存在，甚至能發(fā)現(xiàn)卵巢腫瘤，區(qū)分固體腫塊和液體囊腫，判斷腫塊的尺寸，以及觀察腫塊內(nèi)部的情況等。盡管如此，影像學(xué)檢查無法判定卵巢腫塊是良性或惡性，且其成本高、價(jià)格昂貴、普適性低。組織病理切片檢查需要通過手術(shù)切除選取標(biāo)本，制成病理切片，用顯微鏡檢查病變。病理切片是卵巢癌確診的主要手段，但其缺點(diǎn)是需要手術(shù)、創(chuàng)傷性大，且無法發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移病灶。這些影像學(xué)檢查、組織病理切片方法通常僅適用于中晚期卵巢癌病人的檢查。

　　通過體液檢測(cè)卵巢癌相關(guān)標(biāo)志物是更為便捷、經(jīng)濟(jì)的方法[1，7，8]。卵巢癌標(biāo)志物主要有人附睪蛋白4、癌抗原-125(Cancer antigen 125， CA-125)和間皮素等，其中CA-125在臨床上已被用于卵巢癌的篩查[9～11]。CA-125是一種糖類蛋白質(zhì)，中晚期卵巢癌患者的CA-125水平會(huì)升高，但是檢測(cè)CA-125對(duì)早期卵巢癌的篩檢并不適用，有些其它疾病或健康女性在特定生理周期也會(huì)引起血清中的CA-125水平升高。此外，在卵巢癌早期僅有25%左右的患者CA-125的水平升高[12]。因此，通過CA-125篩查早期卵巢癌具有高的假陽性和漏診率。溶血磷脂酸(Lysobisphosphatidic acids， LPA)在卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲等方面發(fā)揮了重要作用。在卵巢癌早期，新血管增生對(duì)腫瘤的增殖至關(guān)重要。Song等[14]研究發(fā)現(xiàn)，LPA能誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞高度表達(dá)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor， VEGF)，而VEGF能在腫瘤部位誘導(dǎo)血管新生。LPA能促使卵巢癌細(xì)胞增值轉(zhuǎn)錄因子(主要為叉頭框蛋白M1， forkhead box M1)表達(dá)，而直接誘導(dǎo)卵巢癌增殖[15]。另外，LPA能促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9， MMP9)的表達(dá)，MMP9能促進(jìn)卵巢癌轉(zhuǎn)移和侵襲[16]。這說明LPA在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用[16～18]。據(jù)報(bào)道，卵巢癌早期患者血清中的LPA升高率達(dá)90%，而中晚期患者可達(dá)100%[19]。LPA是一種脂類物質(zhì)，易從血液、腹水、唾液等中提取，因而便于進(jìn)行分析和檢測(cè)。上述結(jié)果表明， LPA是具有臨床應(yīng)用前景的卵巢癌早期標(biāo)記物。

　　基于LPA檢測(cè)的重要意義，大量檢測(cè)手段、生物探針被開發(fā)用于檢測(cè)LPA[12，20～33]。本研究組也構(gòu)建了聚丁二炔比色探針檢測(cè)血清中的LPA[21]。當(dāng)前， LPA的檢測(cè)主要通過液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、氣相色譜與原子吸收光譜或質(zhì)譜聯(lián)用等方法實(shí)現(xiàn)[13，23，34～50]。這些方法具有靈敏度高、普適性好的優(yōu)勢(shì)，但缺點(diǎn)是耗時(shí)、操作復(fù)雜和成本高。LPA也可以通過熒光法、比色法和電化學(xué)發(fā)光等便捷、經(jīng)濟(jì)的方法進(jìn)行檢測(cè)，然而它們的特異性和靈敏度需要進(jìn)一步提高。近年來，由于納米技術(shù)、光譜技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，LPA檢測(cè)方法在靈敏度、特異性等方面取得了很大的進(jìn)展。本文對(duì)LPA檢測(cè)主要方法進(jìn)行分類闡述， 對(duì)相關(guān)檢測(cè)機(jī)理和影響因素進(jìn)行了深入的探討，重點(diǎn)介紹了該領(lǐng)域最新進(jìn)展，最后展望了LPA檢測(cè)在臨床應(yīng)用中面臨的挑戰(zhàn)和機(jī)遇。

　　2 質(zhì)譜法檢測(cè)LPA

　　質(zhì)譜技術(shù)具有靈敏度高、準(zhǔn)確性高、響應(yīng)時(shí)間快、需要的樣本量少、通量高等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于生物樣品的分析和檢測(cè)[51]，已經(jīng)成為生物樣品中脂質(zhì)分析的常規(guī)技術(shù)。

　　質(zhì)譜檢測(cè)LPA的準(zhǔn)確性主要依靠分離技術(shù)。采用質(zhì)譜檢測(cè)體液(主要包括血液、尿液、唾液等)樣本中的LPA通常按照如圖1所示的流程[13]，分8個(gè)步驟進(jìn)行。首先是樣本收集，然后經(jīng)過脂質(zhì)抽提和色譜分離后，再進(jìn)入質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)和分析[52]。體液樣本中最普遍采用的是血液樣本。血液中LPA的豐度比溶血磷脂酰膽堿低兩個(gè)數(shù)量級(jí)，同時(shí)還包含與LPA具有類似結(jié)構(gòu)的溶血磷脂酰絲氨酸、磷脂酰膽堿等，這些脂質(zhì)分子都會(huì)對(duì)質(zhì)譜檢測(cè)LPA造成干擾。近年來，在LPA的抽提和分離方面的研究也取得了很大的進(jìn)展。對(duì)于抽提方法，已從傳統(tǒng)的甲醇/氯仿脂質(zhì)液-液提取法(Bligh & dyer方法)發(fā)展到固-液提取法。對(duì)于分離方法，也從早期的毛細(xì)管電泳法、薄層色譜法等發(fā)展到高效液相色譜法等。目前，高效液相色譜法已經(jīng)成為分離LPA的常規(guī)方法。質(zhì)譜技術(shù)中，常規(guī)的電子碰撞電離、電噴霧電離和基質(zhì)輔助激光解吸電離技術(shù)都已被用于LPA的檢測(cè)。 本文將從抽提、分離方法和電離方式三個(gè)方面對(duì)質(zhì)譜法檢測(cè)LPA的最新進(jìn)展進(jìn)行歸納和總結(jié)。

　　作者：李年生; 陳立; 肖祚庥; 楊禹祺; 艾可龍

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