摘 要：為了使巴戟天配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更加科學(xué)規(guī)范，通過(guò)對(duì)15批產(chǎn)自不同地區(qū)的巴戟天飲片進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)湯劑的制備，以及對(duì)標(biāo)準(zhǔn)湯劑干膏粉進(jìn)行研究，確定了巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑的出膏率范圍;采用高效液相色譜法對(duì)主含成分耐斯糖進(jìn)行了含量測(cè)定，研究了巴戟天配方顆粒的PLC特征圖譜分析方法，并對(duì)特征譜圖中的水晶蘭苷進(jìn)行了指認(rèn)。結(jié)果表明，在以流動(dòng)相作為提取溶劑、甲醇-水(二者體積比為3∶97)為流動(dòng)相的條件下，耐斯糖含量的轉(zhuǎn)移率范圍為73.21%～94.49%，標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率范圍為49.05%～55.87%。基于巴戟天配方顆粒的標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜研究方法嚴(yán)謹(jǐn)、可行，更加科學(xué)地闡明了配方顆粒與標(biāo)準(zhǔn)湯劑研究的一致性。

　　關(guān)鍵詞：中藥化學(xué);巴戟天;標(biāo)準(zhǔn)湯劑;轉(zhuǎn)移率;出膏率;特征圖譜

　　《重型汽車(chē)》(雙月刊)創(chuàng)刊于1987年，是由中國(guó)重汽技術(shù)中心主辦的國(guó)家級(jí)期刊,面向國(guó)內(nèi)外公開(kāi)發(fā)行,是國(guó)內(nèi)重型汽車(chē)行業(yè)唯一一份公開(kāi)發(fā)行的權(quán)威刊物,集技術(shù)性與綜合性、理論性與實(shí)用性為一體,在汽車(chē)類(lèi)期刊中占具重要地位。

　　巴戟天為茜草科植物巴戟天[WTBX]Morinda officinalis ow的干燥根[1]，是中國(guó)著名的“四大南藥”之一[2]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[3]，味甘辛，性微溫，具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕之功效，用于治療陽(yáng)痿遺精、宮冷不孕、月經(jīng)不調(diào)、風(fēng)濕痹痛、筋骨痿軟等[4]。巴戟天藥材中主要含有蒽醌類(lèi)、環(huán)烯醚萜苷類(lèi)、多糖類(lèi)等成分[5-7]。其中，蒽醌類(lèi)化合物主要有2-羥基-1-甲氧基蒽醌、rubiasin A和rubiasin B等，均具有抗菌、降壓、降脂、抗癌、抗病毒、凝血等活性[8]。環(huán)烯醚萜苷類(lèi)化合物主要包括水晶蘭苷[9]、四乙酰車(chē)葉草苷[10]等，具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用。目前，從巴戟天中分離得到的糖類(lèi)主要有水溶性多糖(MOP-1)、甘露糖、巴戟甲素(原稱(chēng)巴戟素)、耐斯糖等多種低聚糖，研究表明其具有顯著的抗抑郁作用。

　　飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑是以中醫(yī)理論為指導(dǎo)、臨床應(yīng)用為基礎(chǔ)，參考現(xiàn)代提取方法，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化工藝制備而成的單味中藥飲片水煎劑，其規(guī)范了工藝參數(shù)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立原則[11]。配方顆粒的各項(xiàng)指標(biāo)及生產(chǎn)過(guò)程必須與標(biāo)準(zhǔn)湯劑確定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相吻合。本研究按照標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備方法，以采自15個(gè)不同產(chǎn)地的巴戟天飲片為原料制備標(biāo)準(zhǔn)湯劑，測(cè)定15批巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑的干膏量，確定出膏率范圍，并對(duì)耐斯糖進(jìn)行含量測(cè)定，確定含量及轉(zhuǎn)移率范圍。經(jīng)過(guò)方法摸索，得出巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑的PLC特征圖譜，以期使巴戟天配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)更加科學(xué)和規(guī)范。

　　1 主要儀器與試藥

　　Shimadzu Corporation LC-20AT高效液相色譜儀，Sartouius CPA225D分析天平，水循環(huán)真空泵，SENCO Technology Co.Ltd.提供;M-A5002電子天平，浙江余姚市紀(jì)銘稱(chēng)重校驗(yàn)設(shè)備有限公司提供;DG-9140A干燥箱，江蘇太倉(cāng)精宏儀器設(shè)備有限公司提供;超聲波清洗器，江蘇昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司提供。

　　耐斯糖對(duì)照品，批號(hào)為111891-201403;水晶蘭苷對(duì)照品，批號(hào)為111870-201303;乙腈，批號(hào)為20161014;甲醇，色譜純，批號(hào)為20161020;水，純化水;磷酸，分析純。

　　巴戟天藥材共計(jì)15批，經(jīng)河北省藥品檢驗(yàn)研究院孫寶惠老師鑒定為正品，樣品來(lái)源信息見(jiàn)表1。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品制備

　　取巴戟天飲片100 g，放入2 L圓底燒瓶中，加水提取2次。第一煎加水900 mL，先泡30 min，然后開(kāi)啟加熱，煮沸后計(jì)時(shí)60 min;第二煎加水700 mL，煮沸后計(jì)時(shí)40 min。合并2次煎液，使用孔徑為0.048 mm的過(guò)濾材質(zhì)，在藥液熱時(shí)進(jìn)行過(guò)濾。將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器于低溫(55 ℃，-0.095 MPa)濃縮，濃縮至相對(duì)密度為1.03～1.06(55 ℃)的流浸膏，放置在不銹鋼盤(pán)中冷凍干燥，制成標(biāo)準(zhǔn)湯劑干燥粉末[12-18]。

　　2.2 標(biāo)準(zhǔn)湯劑中耐斯糖含量的測(cè)定

　　2.2.1 色譜條件

　　以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相組成水與甲醇體積比為97∶3，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，理論塔板數(shù)按耐斯糖峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

　　2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

　　取耐斯糖標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱(chēng)定，置于50 mL容量瓶中，加入流動(dòng)相，制成每1 mL含200 μg的溶液。

　　2.2.3 供試品溶液的制備

　　取巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑0.2 g，精密稱(chēng)定，置于150 mL具塞錐形瓶中，精密加入流動(dòng)相50 mL，稱(chēng)重，于沸水浴中加熱30 min，放冷，再次稱(chēng)重，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，即得[19]。

　　2.2.4 測(cè)定方法

　　精密吸取對(duì)照品溶液10 μL、對(duì)照品溶液30 μL、供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，采用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算。

　　2.2.5 線性關(guān)系考察

　　精密吸取對(duì)照品溶液50，100，200，300，400 μL，按“221”所述條件進(jìn)樣分析，縱坐標(biāo)為耐斯糖峰面積的對(duì)數(shù)值，橫坐標(biāo)為耐斯糖進(jìn)樣量的對(duì)數(shù)值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，耐斯糖進(jìn)樣量在1041 9～8334 9 mg范圍內(nèi)，回歸方程為Y=1582 9X+5533×10-1，r=0999 7，表明線性關(guān)系良好。

　　2.2.6 精密度實(shí)驗(yàn)

　　取巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品(標(biāo)3，下同)，按“2.2.3”所述方法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針，測(cè)定峰面積(耐斯糖)的RSD值為0.87%，結(jié)果表明精密度良好。

　　2.2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

　　取巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品，按“2.2.3”所述方法制備供試品溶液，在1，3，6，10，14，18 h進(jìn)樣測(cè)定耐斯糖含量。經(jīng)計(jì)算，各樣品中耐斯糖峰面積的RSD值為1.56%，說(shuō)明18 h內(nèi)此樣品溶液穩(wěn)定。

　　2.2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

　　取巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品供試品6份，每份0.2 g，精密稱(chēng)定。按“2.2.3”所述方法處理標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品，按“2.2.1”所述條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算供試品中耐斯糖含量。6份供試品中耐斯糖含量的RSD值為1.05%，表明該方法重復(fù)性良好。

　　2.2.9 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

　　精密稱(chēng)取巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑樣品，共計(jì)9份，每份約0.1 g，每3份為一組。于每組中精密加入耐斯糖對(duì)照品相當(dāng)于巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑所含耐斯糖量的80%，100%，120%，置于具塞錐形瓶中，按“2.2.1”所述條件進(jìn)樣10 μL進(jìn)行測(cè)定，耐斯糖平均加標(biāo)回收率為10080%，加標(biāo)回收率RSD值為1.51%。表明本方法的準(zhǔn)確度良好，結(jié)果見(jiàn)表2。

　　2.3 15批標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率及含量測(cè)定

　　按“2.1”所述方法制備15批標(biāo)準(zhǔn)湯劑，標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率的計(jì)算取標(biāo)準(zhǔn)湯劑干燥粉末質(zhì)量([WTBX]m2)與巴戟天飲片質(zhì)量(m1)之比值。按“2.2”所述方法測(cè)定巴戟天飲片、巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑的含量，得到含量轉(zhuǎn)移率。15批巴戟天飲片及標(biāo)準(zhǔn)湯劑測(cè)定結(jié)果詳見(jiàn)表3。

　　出膏率=m2/m1，含量轉(zhuǎn)移率=[SX(]標(biāo)準(zhǔn)湯劑含量×出膏率飲片含量[SX)]×100% 。

　　從表3可以看出，15批巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率為49.05%～55.87%，出膏率平均值為52.08%，SD值為2.24;標(biāo)準(zhǔn)湯劑中耐斯糖含量范圍為70.91～92.45 mg/g，平均值為82.55 mg/g，SD值為7.71;耐斯糖含量轉(zhuǎn)移率范圍為73.21%～94.49%，均值為84.05%，SD值為4.88。

　　3 巴戟天標(biāo)準(zhǔn)湯劑特征圖譜的建立

　　3.1 色譜條件

　　色譜柱：Agilent公司ZORBAX Eclipse Plus C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相：乙腈-0.03%磷酸溶液，按表4比例進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm;流速：1 mL/min;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：10 μL。

　　3.2 對(duì)照品溶液的制備

　　精密稱(chēng)取水晶蘭苷對(duì)照品12.5 mg，置于50 mL量瓶中，加入25%(體積分?jǐn)?shù)，下同)甲醇定容，制成每1 mL含水晶蘭苷0.25 mg的對(duì)照品溶液，即得。水晶蘭苷對(duì)照?qǐng)D譜見(jiàn)圖1。