化橘紅為蕓香科植物化州柚Citrus grandis‘Tomentosa’和柚Citrus grandis(L.)Osbeck.未成熟果實的干燥外層果皮[1]，前者稱毛橘紅，后者稱光橘紅。化橘紅有散寒、燥濕、消痰、利氣等功效，用于風寒咳嗽、喉癢痰多、食積傷酒、嘔惡痞悶等[1]。化橘紅富含黃酮類等成分，主要為柚皮苷Naringin、野漆樹苷Rhoifolin等[2]。已有人測定了化橘紅中柚皮苷含量[2]，但尚未見測定化橘紅中柚皮苷元含量的報道。本文以高效液相色譜法測定化橘紅中柚皮苷元含量，并對毛橘紅與光橘紅中柚皮苷元的含量進行了比較分析。

　　1 儀器、試藥與材料

　　11 儀器與材料 Summit 580型高效液相色譜儀系列(德國Dionex);Sartorius BP211D電子分析天平(德國);電熱恒溫水浴鍋(北京市醫療設備廠)。

　　12 試藥 柚皮苷元對照品(為自己分離所得，經綜合解析為柚皮苷元，純度為9856%);甲醇(色譜純);石油醚(60～90℃)、冰醋酸等均為分析純。

　　13 材料

　　毛橘紅1：2000年5月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑約為70cm;

　　毛橘紅2：2000年4月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑約為45cm;

　　毛橘紅3：2000年8月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑不小于4cm;

　　毛橘紅4：2000年8月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑不小于6cm;

　　毛橘紅5：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑小于30cm;

　　毛橘紅6：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑約為16～26?cm;

　　毛橘紅7：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑約為25cm;

　　毛橘紅8：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑約為35cm;

　　毛橘紅9：2002年4月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑約為28～44cm;

　　毛橘紅10：2002年6月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑約為20～54cm;

　　毛橘紅11：2002年6月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑約為54～68cm;

　　毛橘紅12：2002年6月采于廣東省化州市平定鎮，藥材直徑約為55～65cm。

　　光橘紅1：產自湖南省，藥材直徑約40?cm;

　　光橘紅2：產自廣西省，藥材直徑約70?cm;

　　光橘紅3：購自海南省海南大學附屬醫院，市售藥材直徑約92?cm;

　　光橘紅4：購自北京西單金象大藥房，市售藥材直徑約113cm;

　　光橘紅5：購自河南省鄭州市醫藥總公司醫藥大廈，市售藥材直徑約105cm;

　　光橘紅6：購自廣東省揭陽市匯康醫藥有限公司，市售藥材，切片;

　　光橘紅7：購自湖南省常德市吉春堂藥店，市售藥材，切片;

　　光橘紅8：購自云南省楚雄市延壽堂連鎖店，市售藥材，切片;

　　光橘紅9：購自浙江省紹興，市售藥材，切片;

　　光橘紅10：購自山西省太古山西中藥廠藥材經銷部，市售藥材，切片;

　　光橘紅11：購自廣西省，市售藥材直徑約30?cm。

　　2 測定方法

　　21 色譜條件 流動相A：甲醇，流動相B：V水∶V乙酸=61∶4，采用梯度洗脫;色譜柱：MACHEREYNAGEL(1005C18，5μm，250?mm×46mm);流速：10mL/min;檢測波長：283?nm;柱溫：25℃。

　　22 供試品溶液的制備 精密稱定已干燥恒重的樣品1000?g，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)100?mL，水浴回流提取25?h，棄去石油醚液;待樣品中殘存的石油醚全部揮去后，加甲醇100?mL，再置水浴中回流提取4?h以上，提取至無顏色;放冷，濾過，濾液濃縮并轉移至10?mL量瓶中，以甲醇少量分數次洗滌容器及濾紙，洗滌液并入同一量瓶中，甲醇定容至刻度，即得。

　　23 柚皮苷元對照品溶液的制備 準確稱取經干燥(105℃)至恒重的柚皮苷元對照品，加甲醇溶解，制成0088?mg/mL溶液，作為對照品。

　　3 結果和討論

　　31 吸收波長的確定 進行光譜掃描，在283?nm處有一較強吸收峰，故確定283?nm為吸收波長。

　　32 標準曲線 用微量進樣器分別準確吸取對照品溶液各2、4、6、8、10?μL，依次進樣，并記錄峰面積。以進樣體積(μL)為橫坐標、峰面積(mAU?min-1)為縱坐標繪制工作曲線，求得柚皮苷元的回歸方程為Y=51419X-07510，r=09999。在0088～0880?μg范圍內，柚皮苷元與色譜峰面積呈良好的線性關系。

　　33 方法學驗證

　　331 穩定性試驗

　　取同一份供試品溶液，分別在0、15、35、55、25、27?h不同時間點進行測定，考察保留時間和峰面積的一致性，柚皮苷元的保留時間RSD和峰面積RSD分別為0279%和268%。

　　332 精密度試驗

　　取同一份供試品溶液，連續進樣5次，考察色譜峰保留時間和峰面積的一致性，柚皮苷元的保留時間RSD和峰面積的RSD分別為0304%和204%。

　　333 重現性試驗

　　取同一批供試品5份，同法檢測，考察色譜峰保留時間的一致性，柚皮苷元色譜峰保留時間RSD為286%。

　　334 回收率試驗

　　以同一批樣品1g(5份)，精密稱定，分別準確加入柚皮苷元對照品各0176?mg，按供試品溶液制備方法制成樣品溶液，各取10μL進樣，測定含量，結果柚皮苷元平均加樣回收率為9549%，RSD=200%，結果見表1。

　　34 供試品的測定 準確吸取供試品溶液各10?μL，注入高效液相色譜儀中，按高效液相色譜法進行試驗，以柚皮苷元對照品為參照物，依法測定并記錄色譜圖。外標法計算含量，結果見表2，對照品及供試品色譜圖見圖1。

　　35 討論

　　對樣品提取方法中所用溶劑進行薄層色譜(TLC)和高效液相色譜(HPLC)考察表明，石油醚中檢測不到柚皮苷元，甲醇中則存在柚皮苷元;而且，方法學考察也表明，先用石油醚去揮發油，然后用甲醇提取的方法具有可行性。

　　測定結果表明，化橘紅中柚皮苷元含量基本均在01～10mg?g-1之間，毛橘紅與光橘紅中柚皮苷元含量無明顯差異。

　　對柚皮苷元含量與藥材直徑進行比較的結果表明：柚皮苷元含量與藥材直徑成反比，直徑越大，含量越低;而直徑大小與果齡(即果實生長期)成正比，果齡越大，直徑越大，即隨著果齡的增長，柚皮苷元含量逐漸降低，這與化橘紅中總黃酮含量的變化趨勢一致[3]。但化橘紅的指紋圖譜研究顯示柚皮苷元比其他黃酮類成分更穩定[4]。因此，柚皮苷元含量有可能作為衡量化橘紅質量優劣及果齡長短的指標之一，為化橘紅的質量控制及采收期的確定提供依據，其確切關系有待進一步深入研究。

　　本文首次建立了測定化橘紅中柚皮苷元含量的HPLC法，方法簡便準確，重現性好，空白無干擾，適用于化橘紅中柚皮苷元含量測定。

　　參考文獻：

　　[1]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].廣州：廣東科技出版社，2000.56.

　　[2]黃美聲，沈玉剛.反相高效液相色譜法測定化橘紅中柚皮甙的含量[J].中草藥，1990，21(5)：15.

　　[3]袁旭江，林勵，陳志霞.果齡對化橘紅化學成分含量的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2003，14(3)：188.

　　[4]袁旭江.化橘紅藥材指紋圖譜及其質量研究[D].廣州中醫藥大學學位論文，2003.39.