【摘 要】 目的：建立冠心七味片中對甲氧基肉桂酸乙酯的含量測定方法及揮發(fā)性成分的特征圖譜。方法：采用氣相色譜法建立冠心七味片的含量及特征圖譜測定方法。采用DB-FFAP毛細(xì)管柱(30m×0.32mm，0.25μm)，初始溫度150℃，以每分鐘5 ℃的速率升溫至220℃，保持10min;進(jìn)樣溫度230℃，檢測器溫度250℃。結(jié)果：含量測定中對甲氧基肉桂酸乙酯在29.447～588.940ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9993)，平均加樣回收率為97.31%，RSD為1.01%(n=6);建立以對甲氧基肉桂酸乙酯為參照峰的特征圖譜，共11個特征峰。結(jié)論：建立的含量測定及特征圖譜方法可以從定量、定性兩方面對冠心七味片的揮發(fā)性成分進(jìn)行控制，該方法準(zhǔn)確可靠，可用于冠心七味片的質(zhì)量控制。

　　【關(guān)鍵詞】 冠心七味片;氣相色譜;含量測定;特征圖譜;對甲氧基肉桂酸乙酯

　　冠心七味片由丹參、檀香、降香、山柰、肉豆蔻、廣棗、沙棘七味藥材制備而成，具有活血化瘀、強(qiáng)心止痛的作用，用于冠心病、心煩心悸、心絞痛等癥。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》蒙藥分冊1998年版，中文名為“冠心七味片”，蒙文名為“烏蘭·溫都順-7”，收載項目為【處方】【制法】【性狀】【檢查】項[1]。近年來仿制該品種生產(chǎn)企業(yè)增多，各企業(yè)注冊標(biāo)準(zhǔn)均有不同程度提高，但均無對山柰的質(zhì)量控制，故對其進(jìn)行含量測定以期對其進(jìn)行質(zhì)量控制。基于處方中有檀香、降香、山柰、肉豆蔻四味藥材含揮發(fā)性成分，單一的對其建立標(biāo)準(zhǔn)項目耗時耗力耗材，而中藥特征圖譜是一種多指標(biāo)的質(zhì)量控制模式 ，能夠全面、綜合地反映和控制中藥的質(zhì)量[2]。故而建立該品種揮發(fā)性成分的氣相特征圖譜，可以為該制劑的質(zhì)量評價提供參考依據(jù)。

　　1 儀器與試劑試藥

　　1.1 儀器 日本島津GC-2010氣相色譜儀、Sartorius ME5型電子天平，Mettler XP205型電子天平; AS 5150A超聲清洗儀;ZHT型自動恒溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)、揮發(fā)油提取器。

　　1.2 試劑與試藥 對甲氧基肉桂酸乙酯[北京盛世康普化工技術(shù)研究院(批號：Z06J7B17277)];降香[中國藥品生物制品檢定所(批號：120952-201007)];檀香[中國藥品生物制品檢定所(批號：121240-201002)];肉豆蔻[中國藥品生物制品檢定所(批號：120926-20107)];山柰[中國藥品生物制品檢定所(批號：121504-201203)]。乙酸乙酯為分析純試液，無水硫酸鈉為分析純試藥。

　　2 山柰的含量測定

　　2.1 色譜條件的選擇

　　2.1.1 色譜柱 聚乙二醇20000(PEG-20M)毛細(xì)管柱(柱長30m，內(nèi)徑0.32mm，膜厚度為0.25μm)，本試驗研究用DB-FFAP毛細(xì)管柱。

　　2.1.2 程序升溫 初始溫度150℃，以每分鐘5 ℃的速率升溫至220℃，保持10min;進(jìn)樣溫度230℃，檢測器溫度250℃。

　　2.1.3 理論板數(shù)的確定 對供試品測定結(jié)果表明，對甲氧基肉桂酸乙酯的理論板數(shù)在60000以上均能達(dá)到與相鄰峰分開，故本試驗規(guī)定理論板數(shù)按對甲氧基肉桂酸乙酯峰計應(yīng)不低于60000。

　　2.2 供試品溶液制備方法的選擇

　　2.2.1 提取方法的選擇 參照《中國藥典》2015年版一部山柰鑒別項下提取方法，采用超聲提取方法。

　　2.2.2 提取效率考察 取本品粉末5份，各約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加乙酸乙酯10mL，密塞，稱定重量，分別超聲處理(功率為400W，頻率為40kHz)10min、20min、30min、45min、60min，取出放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，按上述色譜條件測定。結(jié)果見表1。

　　從表中數(shù)據(jù)可見，超聲處理20min后，對甲氧基肉桂酸乙酯含量不再增加，故確定超聲時間為20min。

　　2.3 試驗溶液的制備

　　2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取對甲氧基肉桂酸乙酯對照品適量，加乙酸乙酯制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

　　2.3.2 供試品溶液的制備 取本品粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯10mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率400W，頻率40kHz)20min，取出，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

　　2.4 專屬性考察 按本品處方工藝制備不含山柰的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液(缺山柰)。按上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液與陰性對照溶液各2μL，注入氣相色譜儀。結(jié)果如圖1所示。

　　從圖中可見，供試品色譜中在與對照品色譜保留時間相同的位置上有色譜峰出現(xiàn)，陰性對照在與對照品色譜保留時間相同的位置上也有色譜峰出現(xiàn)，但干擾小于5%，表明該含量測定方法陰性無干擾，專屬性好。

　　2.5 線性考察 取對甲氧基肉桂酸乙酯對照品5.008mg，置10mL量瓶中，加乙酸乙酯使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取0.3μL、0.5μL、1μL、2μL、3μL、4μL、6μL注入氣相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果對甲氧基肉桂酸乙酯在29.447～588.940ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為：Y=2499.1X-53066，r=0.9993，標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)見表2。

　　2.6 精密度試驗 取對照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，進(jìn)樣量2μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積值，其RSD為0.35%，表明儀器精密度良好。

　　2.7 重復(fù)性試驗 取同一批號供試品(批號：34151110)6份，按“2.1.3.2”下方法制備供試品溶液，分別按上述色譜條件進(jìn)行測定，進(jìn)樣量各2μL，結(jié)果見表3。

　　2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一批號供試品(批號：34151110)，按“2.1.3.2”下方法制備供試品溶液，分別按上述色譜條件于0h、2h、4h、8h、12h、16h進(jìn)行測定，結(jié)果見表4。

　　結(jié)果表明，RSD為0.94%，說明本試驗重復(fù)性良好。

　　從表中數(shù)據(jù)可見，供試品溶液在16h內(nèi)穩(wěn)定，穩(wěn)定性良好。

　　2.9 回收率試驗 取同一批號供試品(批號：34151110，含對甲氧基肉桂酸乙酯2.02mg·g-1)6份，各約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入對甲氧基肉桂酸乙酯對照品溶液10mL(濃度為0.09815mg·mL-1)，密塞，稱定重量，超聲處理(功率400W，頻率40kHz)20min，取出，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。按上述色譜條件測定，結(jié)果見表5。

　　加樣回收試驗的回收率在96.20%～98.81%之間，RSD為1.01%，說明該試驗具有較好的準(zhǔn)確性。

　　2.10 耐用性試驗 換同等極性、不同型號的色譜柱，按確定的色譜條件，取重復(fù)性試驗中的4號樣品進(jìn)行測定，結(jié)果見表6。

　　2.11 供試品含量限度確定 根據(jù)模擬樣和投料時所用山柰藥材中對甲氧基肉桂酸乙酯的含量，計算出模擬生產(chǎn)工藝轉(zhuǎn)移率為54%，結(jié)合3家生產(chǎn)企業(yè)提供的山柰原料藥材中對甲氧基肉桂酸乙酯的含量數(shù)據(jù)，詳見表7，以50%的轉(zhuǎn)移率計算，該品種每片含對甲氧基肉桂酸乙酯應(yīng)不得少于0.60mg。

　　2.12 結(jié)果 按照建立的方法對8家生產(chǎn)企業(yè)71批次冠心七味片樣品進(jìn)行了含量測定，結(jié)果從0.20mg·片-1到2.53mg·片-1，其中有10批次樣品含量低于擬定的限度值(0.6mg·片-1)，可見對其進(jìn)行含量測定存在必要性。

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